陳魏學基因系列視頻- 單細胞RNAseq測序原理2 筆記
- 該方法的優勢是：利用轉錄實現cDNA的擴增（每一輪轉錄可以擴大幾千倍，兩輪擴增達到幾百萬倍），避免使用PCR擴增帶來的PCR偏差（不同擴增子間擴增效率差異隨著循環達到幾十次而達到指數級別）
具體流程如下
TargetAmp法流程圖
step 1：逆轉錄起始引物5'端是T7啟動子序列，3'端是Oligo dT(結合mRNA polyA尾巴)，用于得到cDNA的第一鏈
step 2: cDNA的第一鏈上引入T7啟動子，并用RNase H消化mRNA鏈
step 3: 合成cDNA的第二鏈
step 4：用T7啟動子和合成的雙鏈cDNA轉錄出大量anti-sense RNA；再用純化過的aRNA和隨即引物通過逆轉錄合成新的cDNA
step 5: 用T7-Oligo dT引物進行step 1～3
step 6: 用得到的雙鏈cDNA進行step 4，得到第二輪的aRNA(可以達到微克級別，再經過一輪逆轉錄就可以得到幾微克的cDNA，用于建庫測序)
