食管鱗狀細胞癌（ESCC）是癌癥的主要組織學亞型，患者的發病率和死亡率較高，是一種常見的侵襲性惡性腫瘤，其分子機制和預后生物標志物尚不清楚。
2023年6月，中國醫學科學院劉芝華團隊在?Signal Transduction and Targeted Therapy（IF=39.3）在線發表題為“RPS15 interacted with IGF2BP1 to promote esophageal squamous cell carcinoma development via recognizing m6A modification”的研究，揭示了核糖體蛋白RPS15與 IGF2BP1通過識別m6A修飾相互作用進而促進食管鱗狀細胞癌的發生，并提出靶向RPS15的小分子抑制劑葉酸聯合DPP可以作為新的食管癌治療策略。
研究材料
人食管癌癥組織及癌旁組織、人ESCC細胞系、小鼠食管癌組織及對照等。
研究方法
Ribo-seq、RNA-seq、CoIP、免疫組化（IHC）、蛋白印跡（WB）、m6A qPCR、RIP-qPCR等。
研究思路
主要結果
1.確定關鍵分子：核糖體蛋白RPS15，其高表達與ESCC轉移及預后不良相關
研究構建了基于靶向核糖體大亞基蛋白（RPLs）和核糖體小亞基蛋白（RPSs）的 CRISPR SAM 系統模型，篩選ESCC轉移中發揮關鍵作用的核糖體蛋白，結合qPCR、IHC等驗證實驗，發現高水平的RPS15與食管癌患者的淋巴結轉移能力顯著正相關，且與食管癌患者的不良預后有關；體內、外功能實驗表明高水平的RPS15促進ESCC的進展與轉移。
2.確定目標分子功能：RPS15選擇性增強p38 MAPK和E2F通路相關基因的翻譯效率
通過Ribo-seq（諾禾致源提供Ribo-seq建庫測序服務）與轉錄組關聯分析，結果表明：高水平的RPS15增強了p38 MAPK通路基因的翻譯效率，以及E2F通路中的參與細胞周期和細胞分裂相關基因的翻譯效率。研究認為：RPS15高表達對E2F和MAPK通路中編碼基因的轉錄本翻譯效率具有選擇性增強的影響。研究進一步通過p38 MAPK抑制劑（SB203580）測試了RPS15在ESCC惡性表型中的調節作用：RPS15的過表達顯著增加了ESCC細胞的遷移和侵襲能力。
3.機制探究：RPS15通過IGF2BP1與MAPK14和MKK6 mRNA轉錄本的直接結合調節p38 MAPK通路
免疫沉淀、銀染、質譜、分子對接模型等表明RPS15通過其D82位氨基酸位點與IGF2BP1（m6A閱讀蛋白）的KH3-4結構域直接結合，增強了整體蛋白質翻譯，并選擇性地增強了MAPK途徑基因轉錄本的翻譯。結合RIP-seq數據分析結果、m6A qPCR 實驗及RIP-qPCR實驗表明，IGF2BP1以m6A依賴的方式識別并結合MAPK14和MKK6 mRNA 3′UTR區。進一步結合蛋白印跡等驗證實驗，發現RPS15促進了p38 MAPK通路核心蛋白的翻譯效率，促進ESCC細胞的增殖和轉移。最后，在明確RPS15的惡性功能及分子機制的基礎上，研究進一步探究了靶向RPS15成藥的可能性。通過篩選一個已上市的藥物數據庫，結合體內、外篩選驗證，最終發現葉酸（T0062）促進RPS15降解從而對ESCC具有治療作用，并通過與DDP（順鉑）聯合可增強這種作用。
本研究確定了核糖體蛋白RPS15對食管癌進展的促進作用：RPS15與IGF2BP1的KH3-4結構域相互作用，IGF2BP1直接結合并識別MAPK14和MKK6 mRNA 3′UTR區，并促進p38 MAPK通路核心蛋白的翻譯。此外葉酸抑制RPS15、IGF2BP1敲除或SB203580治療將通過p38 MAPK信號通路抑制ESCC轉移和增殖。研究結果表明RPS15有望成為ESCC患者新的治療靶點。
